分子熒光光譜法測定水楊酸和乙酰水楊酸
A. 實驗原理
乙酰水楊酸通常稱為阿司匹林,其水解能生成水楊酸,而阿司匹林中或多或少存在著水楊酸。由于二者都有苯環,也有一定的熒光效率,所以可在以三氯甲烷為溶劑的條件下用熒光光譜法測定。在1%(體積分數,下同)乙酸-氯仿中,由于二者的激發波長和發射波長均不相同,可利用此特點,在其各自的激發波長和發射波長下分別測定。加少量乙酸可以增加二者的熒光強度。
為了消除藥片之間的差異,可取5-10片藥片一起研磨成粉末,然后取一定量有代表性的粉末樣品(相當于一片的量)進行分析。
B. 儀器、試劑
1.儀器
RF-530IPC熒光分光光度計;電子天平。
容量瓶(50 mL、100 mL、:1000 mL);移液管(5 mL、10 mL);1%乙酸-氯仿溶液。
2.試劑
水楊酸(分析純); 乙酸(分析純);氯仿(分析純);水楊酸(分析純);阿司匹林(分析純)。
3.標準溶液的配制
(1)乙酰水楊酸儲備液(400μg·mL^-1):稱取0.4000 g乙酰水楊酸溶于1%乙酸-氯仿溶液中,用1%乙酸-氯仿溶液定容于1000 mL容量瓶中。
(2)水楊酸儲備液(750μg·mL^-1):稱取0.750 g乙酰水楊酸溶于1%乙酸-氯仿溶夜中,并用其定容于1000 mL容量瓶中。
C. 實驗步驟
1.繪制激發光譜和發射光譜
將乙酰水楊酸和水楊酸儲備液分別稀釋100倍(可每次稀釋10倍,分兩次完成)。用該溶液分別繪偉水楊酸和水楊酸的激發光譜和發射光譜,并分別確定它們的最大激發波長和最大發射波長。
2.制作標準曲線
(1)乙酰水楊酸標準曲線:在5個50 mL容量瓶中,用移液管分別加入4.00μg·mL^-1酰水楊酸溶液2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL,用1%乙酸-氯仿溶液稀釋至刻度,搖勻。在選定的激發波長和發射波長分別測量它們的熒光強度。
(2)水楊酸標準曲線:在5個50 mL容量瓶中,用移液管分別加入7.50 μg·mL^-1楊酸溶液2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL,用1%乙酸-氯仿溶液稀至刻度,搖勻。在選定的激發波長和發射波長分別測量它們的熒光強度。
3.樣品中乙酰水楊酸和水楊酸的測定
將5片阿司匹林藥品稱量后研磨成粉末,準確稱取400.0 mg粉末,用1%乙酸-氯仿容液溶解,全部轉移至100 mL容量瓶中,用1%乙酸-氯仿溶液稀釋至刻度。迅速通過濾紙過濾,用該濾液在與標準溶液相同條件下測量水楊酸的熒光強度。
將上述濾液稀釋1000倍(分三次稀釋完成),在與標準溶液相同條件下測量乙酰水楊酸的熒光強度。
D. 注意事項
阿司匹林藥片溶解后,必須在1h內完成測定,否則乙酰水楊酸的含量將降低。
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