分子熒光光譜法測定水楊酸和乙酰水楊酸

A. 實驗原理
乙酰水楊酸通常稱為阿司匹林，其水解能生成水楊酸，而阿司匹林中或多或少存在著水楊酸。由于二者都有苯環，也有一定的熒光效率，所以可在以三氯甲烷為溶劑的條件下用熒光光譜法測定。在1%（體積分數，下同）乙酸-氯仿中，由于二者的激發波長和發射波長均不相同，可利用此特點，在其各自的激發波長和發射波長下分別測定。加少量乙酸可以增加二者的熒光強度。
為了消除藥片之間的差異，可取5-10片藥片一起研磨成粉末，然后取一定量有代表性的粉末樣品（相當于一片的量）進行分析。
B. 儀器、試劑
1．儀器
RF-530IPC熒光分光光度計；電子天平。
容量瓶(50 mL、100 mL、：1000 mL);移液管(5 mL、10 mL);1%乙酸-氯仿溶液。
2．試劑
水楊酸（分析純）；  乙酸（分析純）；氯仿（分析純）；水楊酸（分析純）；阿司匹林（分析純）。
3．標準溶液的配制
(1)乙酰水楊酸儲備液（400μg·mL^-1）：稱取0.4000 g乙酰水楊酸溶于1%乙酸-氯仿溶液中，用1%乙酸-氯仿溶液定容于1000 mL容量瓶中。
(2)水楊酸儲備液（750μg·mL^-1）：稱取0.750 g乙酰水楊酸溶于1%乙酸-氯仿溶夜中，并用其定容于1000 mL容量瓶中。
C. 實驗步驟
1．繪制激發光譜和發射光譜
將乙酰水楊酸和水楊酸儲備液分別稀釋100倍（可每次稀釋10倍，分兩次完成）。用該溶液分別繪偉水楊酸和水楊酸的激發光譜和發射光譜，并分別確定它們的最大激發波長和最大發射波長。
2．制作標準曲線
(1)乙酰水楊酸標準曲線：在5個50 mL容量瓶中，用移液管分別加入4.00μg·mL^-1酰水楊酸溶液2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL，用1%乙酸-氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻。在選定的激發波長和發射波長分別測量它們的熒光強度。
(2)水楊酸標準曲線：在5個50 mL容量瓶中，用移液管分別加入7.50 μg·mL^-1楊酸溶液2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL，用1%乙酸-氯仿溶液稀至刻度，搖勻。在選定的激發波長和發射波長分別測量它們的熒光強度。
3．樣品中乙酰水楊酸和水楊酸的測定
將5片阿司匹林藥品稱量后研磨成粉末，準確稱取400.0 mg粉末，用1%乙酸-氯仿容液溶解，全部轉移至100 mL容量瓶中，用1%乙酸-氯仿溶液稀釋至刻度。迅速通過濾紙過濾，用該濾液在與標準溶液相同條件下測量水楊酸的熒光強度。
將上述濾液稀釋1000倍（分三次稀釋完成），在與標準溶液相同條件下測量乙酰水楊酸的熒光強度。
D. 注意事項
阿司匹林藥片溶解后，必須在1h內完成測定，否則乙酰水楊酸的含量將降低。

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